菌种培养采取大肠杆菌Escherichia Coli A.S.1.357，牛肉汁培养基100ml，蛋白胨1g，氯化钠0.5g和琼脂2～2.5g,在37⁰C下，试管培养24h，茄瓶培养8h ,锥瓶培养16h。
大肠杆菌^{肉汤培养基；370C;2d}→_菌种培养肉汤菌种
种子培养培养基用10%的玉米浆接种量1%～1.5%，在37⁰C下，通气搅拌培养6～8h。
肉汤菌种^{玉米浆；370C;6h}→_种子培养种子菌种
发酵罐培养取10%玉米浆接种量8%，在37⁰C下，通气搅拌培养6～8h，离心，分离发酵液，得菌体，搅拌下加入2倍发酵液量的丙酮，压滤，滤饼过筛，自然风干成菌体干粉。
种子菌种^{玉米浆; 370C；7h}→_{发酵罐培养}发酵液^丙酮→_{压滤，风干}干菌体
提取、沉淀每千克菌体干粉加入pH8的硼酸缓冲液（0.01mol/L）10L，在搅拌下37⁰C保温1.5h后，降温到30⁰C左或，用乙酸溶液（5mol/L） 调节pH4.2～4.4,压滤，加入2倍于滤液体积的丙酮，静置3～4h，待沉淀完全，过滤，收集沉淀，晾干，即得干粗酶。
干菌体^{硼酸缓冲液；pH8;370C}→_提取提取液^HAc;pH4.3→_沉淀干粗酶
热处理取粗制酶1g 加入20ml 甘氨酸溶液（3g/L即0.3g），调节pH8.8,搅拌1.5h，离心，收集上清液，加热到60⁰C，热处理30min。离心弃去沉淀，上清液加2倍体积的丙酮，析出沉淀，离心，收集酶沉淀，加pH8磷酸缓冲液（0.01mol/L），再离心弃去不溶物，得上清酶沉液。
干粗酶^{甘氨酸；600;30min}→_热处理酶溶液
精制、冻干调节pH8.8酶溶液，离心弃支沉淀，上清液再调pH7.7,在上清液中加聚乙二醇（500g/L即50%），使聚乙二醇的浓度达到160g/L（16%），在温度2～5⁰C时，放置4～5d，有沉淀析出，离心分离沉淀。加蒸馏水使之溶解，加4倍溶液量的丙酮，沉淀，同法重复1次，沉淀用pH6.4磷酸缓冲液（0.05mol/L）溶解，得精制酶溶液。调节pH至5～5.2，再加聚乙二醇（500g/L）,如此重复处理1次。再调pH7.7，加聚乙二醇（500 g/L）溶解，在无菌条件下用6号垂熔漏斗过滤，分装，冷冻干燥，即得注射用（天）门冬酰胺酶成品，每支10000U或20000U。
酶溶液^{聚乙醇；不同pH处理}→_精制无热原酶液
^无菌分装→_冻干（天）门冬酰胺酶冻干制剂