大规模生产以喷妥司汀的产生菌Streptomyces antibioticus进行浸入或深层培养来制备：
一、发酵
经选择的培养基植入灭过菌的水溶性营养液，在无菌条件下，于20～45℃(最好是33～40℃)，充气和搅拌培育，直至培养液中出现喷妥司汀。影响获得最大收率的时间的长短的因素是所用设备的类型和大小、搅拌的速度，充气的速度，微生物培养基和其它因素。在罐形发酵器中进行的大
规模工业发酵，进行3～7d最大收率。也可采用较短的发酵时间，但收率较低。当在振荡瓶进行发酵时，所需的时间比用大容积的发酵罐的时间要长。
在浸入培养时，微生物生长成分布于整个营养液的不连续的颗粒；而在表面培养时，是在营养液的表面形成连续的薄膜。由于微生物分布在整个营养液中，因而在采用发酵工业中使用的罐和缸进行微生物培养时，可以采用大容积的接种营养液。装有搅拌和充气装置的连续缸形发酵器特别适合大规模生产，但也可以使用其它发酵设备。在小量生产或制备用于大规模发酵的微生物培养基时，浸入培养可在小烧瓶中进行，可以采用适合的方法进行振荡或搅拌。在浸入培养时，培养液的充气和搅拌可用许多方式来完成。搅拌可用涡轮机、桨状搅拌器、叶轮推进器等其它机械搅拌设备，也可旋转或振荡发酵器本
身，或用各种泵设备往营养液中注入空气或氧气而获得。充气可采用开口管、多孔管或带有分配器的管子来注入空气或氧气，或可将营养液喷、泼或溢到氧气气氛中。浸入培养外的另一选择方法是表面培养。此时使用2CM以下薄层的灭过菌的水溶性培养液，植入喷妥司汀的产生菌犛狋狉犲狆狋狅犿狔犲狊犪狀狋犻犫犻狅狋犻犮狌狊，在20～45℃和充氧下进行培育。和浸入培养相似可得产品。
二、分离和提纯
分离可采用压滤或离心分离。滤饼用水彻底洗涤，洗液和滤液合并后，用氢氧化钠、三乙胺或氢氧化铵等碱性水溶液调狆犎值至约9.2。减压浓缩至约剩1／10的体积。浓缩液冷至5℃，时间可在数小时或数天(依据体积大小而定)。
析出的沉淀是9-(B-D-阿拉伯糖基呋喃糖基)腺嘌呤，可用硅藻土作助滤剂过除去。滤液用水稀释至其浓缩前的体积，然后用盐酸或硫酸等水溶性酸调狆犎值至约8.3。用活性炭或其它吸附剂(最好是Darco G-60)来吸附。吸附过程可分批进行，也可通过柱子连续进行。
在批量方法中，把0.5％～10％，最好是约3％(W/V)的活性炭加入滤液，并搅拌1～3h。过滤，滤饼用水洗后，再用丙酮水溶液等量的丙酮和水洗脱。洗脱液浓缩至剩约1％～3％的体积。往浓缩液中加入甲醇，以获得80％甲醇溶液。过滤除去产生的沉淀，滤液浓缩以除去甲醇。浓缩液用5％丙酮的水溶液稀释至其2.5倍的体积，通过一活性炭柱子。该活性炭柱先用5％丙酮水溶液洗，再用10％丙酮水溶
液洗。然后用25％丙酮水溶液洗脱。洗脱液减压浓缩后冻干。将干燥固体溶于小量水中，通过用水制备的装有Sephadex G-10的柱子进行渗滤。用水洗柱子，收集含产品的流出液，干燥，用甲醇水溶液结晶，可得喷司他丁。